產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
快速DNA和RNA結(jié)合試劑盒
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貓。沒(méi)有。 |
產(chǎn)品名稱 |
單位規(guī)模 |
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CA103型 |
BcMag公司? 快速DNA-RNA結(jié)合試劑盒， |
100毫克珠子試劑盒 |
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CA104型 |
BcMag公司? 快速DNA-RNA結(jié)合試劑盒， |
200毫克珠子試劑盒 |
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貓# |
套件組件 |
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CA-103 |
100 mg 2.5μm胺封端磁珠 5ml 2x懸浮緩沖液： 10ml 10x洗滌緩沖液 0.15克EDC（1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亞胺）（收到后儲(chǔ)存在-20攝氏度）° |
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CA-104 |
200 mg 2.5μm胺封端磁珠 10毫升2x懸浮緩沖液： 20ml 10x洗滌緩沖液 0.3克EDC（1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亞胺）（收到后儲(chǔ)存在-20攝氏度）° |
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特殊性 |
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組成 |
胺封端磁珠 |
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胎圈尺寸 |
直徑2.5μm |
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珠子數(shù)量 |
約1.68 x 109珠/毫克 |
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磁化 |
約45列動(dòng)車組/克 |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5克/毫升 |
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穩(wěn)定性 |
pH值4-10 |
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濃度 |
在d2H20中20毫克/毫升 |
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綁定容量 |
>10克寡核苷酸（25個(gè)核苷酸）/毫克 |
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存儲(chǔ) |
收到后保存在4C° |
用快速試劑盒釋放DNA-RNA結(jié)合的力量
快速DNA-RNA結(jié)合方案試劑盒提供了快速有效結(jié)合DNA和RNA分子所需的工具。只需一步即可獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，并利用快速試劑盒探索DNA-RNA結(jié)合的力量。
導(dǎo)言
已經(jīng)創(chuàng)建了許多DNA微陣列設(shè)備和芯片來(lái)通過(guò)固相雜交檢測(cè)DNA或RNA。這些生物芯片通常基于DNA在固體表面上的固定。它們可以從少量樣品中收集并結(jié)合感興趣的互補(bǔ)DNA/RNA。由于其在法醫(yī)學(xué)，環(huán)境調(diào)查，診斷和基因表達(dá)分析，單核苷酸多態(tài)性和突變檢測(cè)，DNA測(cè)序或遺傳疾病診斷，基因表達(dá)分析，單核苷酸多態(tài)性和突變檢測(cè)中的應(yīng)用，DNA/RNA在固體表面上的固定化變得越來(lái)越重要。
BcMag公司? Quick DNA-RNA共軛試劑盒旨在快速有效地將DNA，RNA或磷酸鹽修飾的RNA/DNA寡核苷酸固定到我們專有的磁珠上。為了更安全的連接，該試劑盒設(shè)計(jì)用于使用交聯(lián)劑1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺（EDC）將DNA/RNA的5'磷酸基團(tuán)共價(jià)固定在胺封端的磁珠上（圖1）。我們專有的中性偶聯(lián)緩沖液使綴合非常有效（>85%）。綴合的DNA非常穩(wěn)定，可用于許多下游應(yīng)用。
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
· 快速、簡(jiǎn)單、一步到位的協(xié)議
· 中性鍵在磷酸鹽和胺之間形成中性酰胺鍵
· 穩(wěn)定的共價(jià)鍵，配體泄漏最小
· 固定效率高
· 可擴(kuò)展-可輕松調(diào)整樣本量和自動(dòng)化程度
· 可重復(fù)的結(jié)果
協(xié)議
該協(xié)議可以適當(dāng)?shù)胤糯蠡蚩s小。
所需材料
? 磁性機(jī)架（手動(dòng)操作）
根據(jù)樣品體積，用戶可以選擇以下磁架之一：BcMag Rack-2用于容納兩個(gè)單獨(dú)的1.5 ml離心管（目錄號(hào)#MS-01）；BcMag Rack-6用于容納六個(gè)單獨(dú)的1.5 ml離心管（目錄號(hào)#MS-02）；BcMag Rack-24用于容納二十四個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管（目錄號(hào)#MS-03）；BcMag Rack-50用于容納一個(gè)50毫升離心管，一個(gè)15毫升離心管和四個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管（目錄號(hào)#MS-04）；BcMag公司? Rack-96用于固定96 ELISA板或PCR板（目錄號(hào)#MS-05）。對(duì)于大規(guī)模凈化，陶瓷磁體塊用于大規(guī)模凈化（6英寸x 4英寸x 1英寸塊鐵氧體磁體，應(yīng)用磁體，Cat#Ceramic-B8）
? 用于大規(guī)模純化的康寧430825細(xì)胞培養(yǎng)瓶（Cole Parmer，Cat#EW-01936-22）
? Mini BlotBoy 3D搖桿，定速，小型10“x 7.5”平臺(tái)，帶平板墊（Benchmark Scientific，Inc.Cat#B3D1008）或兼容
A. DNA/RNA樣品制備
注意：
a. 所有樣品（DNA/RNA）都不能懸浮在TE或含胺緩沖液中，因?yàn)樗鼤?huì)降低偶聯(lián)效率。
b. 所有樣品（DNA/RNA）的5'端必須有一個(gè)磷酸基團(tuán)。商業(yè)寡核苷酸合成公司可以提供這種服務(wù)或用T4 DNA激酶處理寡核苷酸DNA。寡核苷酸DNA應(yīng)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)脫鹽或其他方法純化。
c. 擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物必須在偶聯(lián)前通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)程序純化。
d. 對(duì)于所有DNA/RNA樣品，小于1kb是偶聯(lián)的首選。
1. 所有樣品（DNA/RNA）應(yīng)以5-10μg/ul的濃度懸浮在超純水或1x懸浮緩沖液中。（可選：吸出5-10μl樣品，轉(zhuǎn)移到新的離心管中，并將管標(biāo)記為C1）
B、 耦合緩沖準(zhǔn)備
1、在1ml 1x懸浮液中加入19 mg EDC制備偶聯(lián)緩沖液（偶聯(lián)緩沖液必須在使用前立即新鮮制備）
C、 聯(lián)軸器
1. 搖動(dòng)瓶子以完全重懸磁珠。
2. 將1ml磁珠（20 mg/ml）轉(zhuǎn)移到試管中。將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時(shí)除去上清液。
3. 從支架上取下試管，用1ml懸浮緩沖液徹底重懸珠子。將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時(shí)除去上清液。
4. 重復(fù)步驟3一次。
5. 從支架上取下試管，用200μl偶聯(lián)緩沖液徹底重懸珠子。將磁珠與由A1制備的100-200μg DNA/RNA混合。
6. 將珠子在50°C下連續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育過(guò)夜。
7. 將試管放在磁性支架上1-3分鐘。取出上清液，同時(shí)將管保留在支架上（可選：吸出5-10μl上清液，轉(zhuǎn)移到新的離心管中，并將管標(biāo)記為C2）。
8. 在室溫下用1 ml洗滌緩沖液洗滌珠子三次，在65°C下用超純水洗滌珠子兩次。
9. 將珠子以5 mg/ml重懸于含有0.2%NaN3的PBS緩沖液中，并保存在4°C。
D、 耦合效率計(jì)算
1. 在A260處測(cè)量外徑
耦合效率（%）=[（C1-C2）/C1]x 100%
C1:A260預(yù)偶聯(lián)DNA/RNA溶液x稀釋因子；C2:A260偶聯(lián)后DNA/RNA溶液。
2. 使用熒光染料定量C1和C2。
一般參考文獻(xiàn)
1. 費(fèi)里爾DC，剃須刀MP，手PJW?；谖⒓{米結(jié)構(gòu)的寡核苷酸傳感器。Biosens生物電子。2015年6月15日；68:798-810。
2. Sethi D，Gandhi RP，Kuma P，Gupta KC。固定寡核苷酸的化學(xué)策略。生物技術(shù)J.2009年11月；4（11）：1513年至15129年。
3. 左P，葉BC。一種使用寡核苷酸作為小分子微陣列構(gòu)建接頭的新型固定化策略。Biosens生物電子。2008年6月15日；23（11）：1694-700。
