產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
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產(chǎn)品信息 |
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組成 |
表面覆蓋有高密度專有化學(xué)官能團(tuán)的磁珠
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穩(wěn)定性 |
短期保存 (<1小時): pH 3-11; 長期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 可溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑 |
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磁化強(qiáng)度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁 |
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濃度 |
100 μg / ml 溶于 dH2O |
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結(jié)合能力 |
50 μg 蛋白 /mg磁珠 |
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儲存 |
室溫運(yùn)輸，收到后保存在 4°C . |
簡介
生物流體樣品研究中，生物樣品中蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的存在經(jīng)常會干擾小分子分析，造成準(zhǔn)確性和靈敏度的降低。許多生物研究實(shí)驗都需要在分析前去除樣品中的蛋白質(zhì)（脫蛋白）和脂質(zhì)（脫脂），例如LC/MS/MS分析。
在過去的半個世紀(jì)里，人們使用三氯乙酸、高氯酸、磷鎢酸、乙腈、甲醇和其他一些有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀的方法被廣泛用于脫蛋白。然而，這些程序不僅繁瑣、耗時、難以適應(yīng)自動化，而且去除脂質(zhì)效率非常低。 BcMag? One-minute Deproteinizing Magnetic Beads 為從細(xì)胞裂解、血漿、血清、組織勻漿、尿液等生物液體樣品中分離蛋白質(zhì)、去脂和核酸提供了一種新的解決方案，用于分析各種小分子。我們的超順磁性磁珠利用表明結(jié)合的專有基團(tuán)，可高效地結(jié)合樣品中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。該實(shí)驗過程簡單方便，僅需一步操作一個試管，無需沉淀、過濾、離心等步驟。本款磁珠可以在不到10分鐘的時間內(nèi)同時處理96個樣品。
操作流程
優(yōu)勢及特點(diǎn)
l 快速簡單的操作過程：僅需一個試管，一步操作無液體轉(zhuǎn)移，不到10分鐘的時間內(nèi)同時處理96個樣品
l 易于使用：無需離心柱、過濾器、費(fèi)力的反復(fù)移液或離心，并且可以根據(jù)實(shí)驗需要調(diào)整樣本體積大小和適用于自動化操作
l 無需有機(jī)溶劑/酸進(jìn)行沉淀
l 極高的脫蛋白效率
操作協(xié)議
A.材料準(zhǔn)備
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Item |
Source |
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磁力分離器
**根據(jù)樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個單獨(dú)的50毫升離心管，1個單獨(dú)的15毫升離心管, 以及4個 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調(diào)單通道和多通道移液器 |
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擺斗離心機(jī) |
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如果使用96孔PCR板/管，則需要添加項目 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時間和速度應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化，并且混合器應(yīng)滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉(zhuǎn)速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf? MixMate? |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24?×?1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 離心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，確保PCR管或PCR板錐形部分底部的井徑必須≥2.5毫米。 |
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如果使用96孔微孔板需要添加的設(shè)備 |
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Fisher Scientific? Microplate Advanced Vortex Mixers |
Fisher, Cat#:02-216-101 |
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OHAUS Microplate Vortex Mixers |
OHAUS, Cat#:30392160 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時間和速度應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化，并且混合器應(yīng)滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉(zhuǎn)速 ≥800 rpm |
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平底透明的非結(jié)合型分析微孔板 |
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B.操作過程
提示：
l 不要使用含有有機(jī)溶劑的緩沖液。
l 為獲得最佳結(jié)果，確保樣品pH值保持在~4.5。
1. 用醋酸鈉或其他緩沖液稀釋并調(diào)整樣品中的蛋白質(zhì)濃度~1mg/ml，pH值至4.5。
2. 震動試劑瓶，使磁珠重新懸浮，直到完全均勻。
重要提示：每2分鐘重新懸浮一次磁珠。分液前必須將磁珠混合。分液時，不要讓磁珠靜置超過2分鐘。
3. 向樣品中加入適量的磁珠（應(yīng)根據(jù)樣品中蛋白質(zhì)濃度和磁珠結(jié)合能力計算磁珠用量，
~50μg蛋白質(zhì)/毫克磁珠）
4. 將樣品與珠子混勻，在1-2分鐘內(nèi)通過移液器緩慢上下移液20-25次，或以2000
rpm（PCR管）或800 rpm（Elisa板）的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)樣品5分鐘。
重要提示：用戶需要根據(jù)表1中列出的磁珠結(jié)合能力，以及所使用渦旋混合器時的
速度和時間，優(yōu)化磁珠和生物樣品的比例。
5. 將反應(yīng)板或樣品管放在磁力分離器上30秒或直到溶液澄清。
（選項：以3500 rpm的轉(zhuǎn)速離心45秒）
6. 將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的反應(yīng)板/試管中，同時將原反應(yīng)板保留在磁力分離器上。純化
好的 樣品已可用于下游應(yīng)用。
C.問題及解決方法
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問題 |
可能原因 |
建議 |
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蛋白清除效率低 |
· 樣品中蛋白含量太多 · 檢查樣品的pH值， 確保pH 為 4.5. |
· 對樣品再次純化 · 調(diào)整pH到4.5. |
D.參考文獻(xiàn)
1. Hu?ek P, Svagera Z, Hanzlíková D, Simek P. Survey of several methods deproteinizing human plasma before and within the
chloroformate-mediated treatment of amino/carboxylic acids quantitated by gas chromatography. J Pharm Biomed Anal. 2012 Aug-Sep;67-68:159-62. doi: 10.1016/j.jpba.2012.04.027. Epub 2012 May 7. PMID: 22633606.
2. Sakuma R, Nishina T, Kitamura M. Deproteinizing methods evaluated for determination of uric acid in serum by
reversed-phase liquid chromatography with ultraviolet detection. Clin Chem. 1987 Aug;33(8):1427-30. PMID: 3608161.
3. álvarez-Guerra ED, Parkes HG, Bell JD. Comparative study of two deproteinization methods for the evaluation of whole
blood and plasma by magnetic resonance spectroscopy. Bioquimia. 20
